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應用方案
賽智科技推出【玉米赤霉烯酮】的高效液相色譜HPLC檢測方案
發(fā)布時間:2015-12-24   
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【玉米赤霉烯酮】

圖片1.jpg

玉米赤霉烯酮是一種酚的二羥基苯酸的內酯結構,分子式為C18H22O50它不溶于水、二硫化碳和四氧化碳,溶于堿性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯和酸類,微溶于石油醚。由于玉米赤霉烯酮是一種內酯的結構,因此在堿性環(huán)境的條件下可以將酯鍵打開,當堿的濃度下降時可將鍵恢復。玉米赤霉烯酮又稱F-2毒素,玉米烯酮。它首先從有赤霉病的玉米中分離得到。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麥、大米、大麥、小米和燕麥等谷物,其中玉米的陽性檢出率為45%,最高含毒量可達到2909mg/kg;小麥的檢出率為20%,含毒量為0.364~11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐熱性較強,110℃下處理1h才被完全破壞。

 

【作用】

玉米赤霉烯酮主要由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生,粉紅鐮刀菌、竄珠鐮刀菌、三線鐮刀菌等多種鐮刀菌也能產(chǎn)生這種毒素。許多農作物如小麥、大豆等植物中也存在玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮有許多種衍生物,例如7一脫氫玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯酸、8一羥基玉米赤霉烯酮。同時,植物中的玉米赤霉烯酮結構和對生物體的影響與霉菌產(chǎn)生的玉米赤霉烯酮作用是一致的,這也為我們預防玉米赤霉烯酮中毒提供了一條途徑。玉米赤霉烯酮是一種特殊毒性的生物毒素,具有類雌激素樣作用,能引起動物流產(chǎn)、死胎、返情等生殖機能異常,還可以導致生長下降、免疫抑制、不育、畸形等。國內外學者做了大量的研究,來揭示玉米赤霉烯酮損害機體的機制。它主要通過影響機體的生殖性能,引起細胞凋亡、致畸、損傷DNA、氧化損害、影響免疫機能等機制,來影響動物與人類的健康。 

 

【樣品處理過程】

標準儲備液(0.1mg/ml):準確稱取一定量標準品,用甲醇+乙腈(1+1)溶解,配成0.1mg/ml的標準液。標準工作液:根據(jù)使用需要準確吸取一定量的玉米赤霉烯酮儲備液,用流動相稀釋,分別配成相當于10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml的標準工作液。用0.45μm的有機系濾膜過濾,精密量取20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。

樣品處理:將樣品研磨,硬質的糧食用高速萬能粉碎機磨細并通過試驗篩,不要磨成粉末,稱取50g(精確到0.01g)磨碎的試樣與100mL容量瓶中,加入5gNaCl,用提取液(乙腈+水(9+1))定容至刻度,混勻,轉移至均質杯中高速攪拌提取2min,定量濾紙過濾,移取10mL濾液于50mL容量瓶中加水定容至刻度,混勻,用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清,收集濾液于干凈的容器中。
       凈化、洗脫:將免疫親和柱連接于玻璃注射器下,準確移取濾液10mL注入玻璃注射器中,將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接,調節(jié)壓力,使溶液以約1滴/s的流速通過,直至空氣進入親和柱中,依次用10mLPBS清洗緩沖液和10mL水淋洗免疫親和柱,流速約為1滴/s-2滴/s直至空氣進入親和柱中,棄去全部流出液抽干小柱,加入1mL甲醇洗脫,再用甲醇定容至1mL。

 

【色譜條件】
      色譜柱: C18反相色譜柱, 4.6 mm*250 mm,粒度5 μm
      流動相:甲醇:水:乙腈=8:46:46
      波長:λex274nm   λem440nm
      流速:1.0mL/min
      進樣量:20μL
      柱溫:30℃ 

 

【譜圖】

圖片2.jpg

 

【儀器配置】

表.jpg 

 

 

 

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